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RT-Basic RNA恒温快速扩增试剂盒(基础型)

产品编号:A4611

产品规格:48次

产品价格:2500

包装:

储存条件:-20℃

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RT-Basic RNA恒温快速扩增试剂盒(基础型)

包装规格:

A4611-48 RT-Basic RNA恒温快速扩增试剂盒(基础型) 48T 2100元

用于RNA扩增,电泳检测

一. 原理概述:

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在恒温条件下(42 °C),特殊修饰的反转录酶利用特异性引物DNA和模板RNA合成cDNA链,反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。适用于实验室级别的RNA扩增以及其他检测用途的RNA扩增使用。

二. 产品特点:
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需30 mins)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。
本试剂对设备要求低,金属浴、水浴锅等即可进行反应操作,无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。

三. 引物设计:

1. 建议使用长度在30-35 bp的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;

2. 碱基排布随机性高,GC 含量在 30%-70%之间;

3. 引物设计避免形成二级结构而影响扩增;

4. 扩增子长度建议在150-300 bp,通常不超过500 bp。


四. 试剂盒储存:
运输条件:低温运输;
储存条件:储存温度 ≤ -20 ºC,避光保存,避免重压、反复冻融;
产品有效期:12个月。 

五. 操作步骤:


提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀。
1).每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);
2).每个反应管分别加入2 μL上游引物和2 μL下游引物(引物浓度10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);
3).向反应管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为14.1 μL); 
4).最后向反应管中加入2.5 μL B Buffer并充分混合(对于多个反应,建议将B Buffer加至反应管的盖子内侧,上下颠倒反应管8-10次混匀);
5).混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入恒温设备中42 ºC孵育30 mins;
6).反应结束后,加入50 μL酚/氯仿,1:1抽提反应溶液,12000 rpm离心5 min,取5 μL上清进行电泳检测或者使用DNA产物纯化试剂盒进行处理。