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RT-Basic RNA恒温快速扩增试剂盒(基础型)

包装规格：

用于RNA扩增，电泳检测

一. 原理概述：

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在恒温条件下（42 °C），特殊修饰的反转录酶利用特异性引物DNA和模板RNA合成cDNA链，反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。适用于实验室级别的RNA扩增以及其他检测用途的RNA扩增使用。

二. 产品特点：
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短（仅需30 mins）等优点，反应组分为干粉状态，操作简便，易于保存。
本试剂对设备要求低，金属浴、水浴锅等即可进行反应操作，无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。

三. 引物设计：

1. 建议使用长度在30-35 bp的引物，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度；

2. 碱基排布随机性高，GC 含量在 30%-70%之间；

3. 引物设计避免形成二级结构而影响扩增；

4. 扩增子长度建议在150-300 bp，通常不超过500 bp。

提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化，震荡混匀。

1).每个干粉反应管加入32.9 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响）；

2).每个反应管分别加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物浓度10 μM，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中）；

3).向反应管中依次加入7 μL ddH2O和3 μL核酸RNA模板（可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为10.6 μL）; 

4).最后向反应管中加入2.5 μL B Buffer并充分混合（对于多个反应，建议将B Buffer加至反应管的盖子内侧，上下颠倒反应管8-10次混匀）；

5).混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中42 ºC孵育30 mins；

6).反应结束后，使用PCR产物纯化回收试剂盒纯化回收扩增产物，或者加入50 μL Tris饱和酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提液，1:1抽提反应溶液，12000 rpm离心5 min，最后取5 μL上清进行电泳检测。