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TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol)

TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol)是一种即用型总RNA抽提试剂,可以快速提取人、动物、植物、酵母和细菌等不同组织或细胞的总RNA,对少量的50-100 mg组织和5×106细胞,以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。操作简单可同时处理多个的样品,所有的操作能在一小时内完成。

产品编号:2101

产品规格:50ml/100ml

产品价格:250/450

包装:

储存条件:4℃

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TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol)

TRIzolplus Total RNA Extraction Reagent


包装规格:

2101S TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol) 25mL 150元
2101A TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol) 50mL 250元
2101B TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol) 100mL 450元
2101C TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol) 5×100mL 1710元


一. 产品介绍:

TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol)是一种即用型总RNA抽提试剂,可以快速提取人、动物、植物、酵母和细菌等不同组织或细胞的总RNA,对少量的50-100 mg组织和5×106细胞,以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。操作简单可同时处理多个的样品,所有的操作能在一小时内完成。

TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol)含有苯酚、异硫氰酸胍等成分,能在裂解样品时迅速破碎细胞,溶解细胞内含物并抑制细胞释放出的核酸酶,同时保持RNA的完整性。研磨后的组织样品加入TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol),样品完全匀浆或裂解后,加入氯*后离心,样品分成:上层无色含RNA的水样层,白色中间层和下层红色的苯酚-氯*有机层。收集上面的水样层,通过异丙醇沉淀来提取RNA,通过乙醇沉淀从中间层和有机层提取DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。

抽提的总RNA没有DNA和蛋白的污染,可用于Northern blot、Dot Blot、RT-PCR、poly(A)+ selection、In tro translation、RNase protection assay and molecular cloning等实验。如果是用于PCR,当两条引物位于单一外显子时,建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。

Trizol能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。

二. 适用范围:

适用于各种动植物组织/细胞总RNA、DNA、蛋白的快速抽提。


三. 储存条件:

在室温下能够稳定保存12个月,为达到最佳效果,建议在4℃冰箱中冷藏保存。


四. 注意事项:
1. 安全提示:抽提RNA时要戴手套和护眼罩,避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作,避免呼吸道吸入,所有的操作应在15-30℃的条件下。有毒物接触皮肤或者不慎吞服,会导致灼伤,一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适,看医生并寻求苯酚和其他成分的正确治疗方案。
2. 实验过程中,经常更换新手套,并使用灭菌的,无RNase的一次性塑料制品和枪头,避免RNase污染。
3. RNA在TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol)中不会被RNase降解,但提取后的处理过程需使用不含RNase的玻璃器皿或塑料制品,玻璃物品在150℃烘烤4小时,塑料制品在0.5 M NaOH溶液中浸泡10min,然后用水冲洗,再高压灭菌,80℃烘烤干燥后,置于干净处待用。
4. 配置溶液应使用RNase-free ddH2O(将水加入干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%(v/v),放置过夜,高压灭菌),如配置75%乙醇需用RNase-free ddH2O配置。
5. 在匀浆后和加入氯*之前,样品在-60~-70℃保存至少一个月,RNA沉淀溶于75%乙醇在2-8℃至少保存一周,在-5~-20℃下至少保存一年。


五. 操作步骤:
1、自备物品:
氯*,异丙醇,75%乙醇(RNase-Free ddH2O配制),RNase-free ddH2O

提示:用TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol) 抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无特殊说明,所有的操作应该在在15~30°C的室温条件下。


1.匀浆
a.植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在Trizol中迅速研磨,每50-100mg组织加入1ml Trizol,混匀。注意:样品体积一般不要超过Trizol体积的10%。 
b.动物组织:取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎,每30-100mg组织加入1ml Trizol,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入Trizol 1ml混匀。注意:样品体积一般不要超过Trizol体积的10%。


c.单层培养细胞:尽量去除干净残留培养液后直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml 的Trizol覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的Trizol 量(每10cm2加1ml)。当Trizol 量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。

注意:贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全破裂开,并已释放出RNA,继续用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×106的动物细胞,植物或酵母菌细胞或每做即可。


d.细胞悬液: 离心收集细胞。 在Trizol 试剂中1×107细菌加1ml的Trizol。在加入Trizol 前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。


e.血液:推荐使用本公司的TRILS Reagent (货号:2107) ,这是全血或者液体样品专用的TRIpure Reagent,LS就是Liquid Sample 液体样品的首字母简写。相当于Invitrogen公司的 TRIzol LS 。


2.将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。


3.可选步骤: 在4°C的条件下以12,000 rpm的离心力离心10分钟,取上清。

如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织的样品时,上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。


4.每1ml Trizol加0.2ml氯仿。盖紧管盖,剧烈震荡15秒并将其在室温下放置2~3分钟。


5.在4°C 12,000 rpm的离心力高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层:下层红色有机苯酚氯仿层,中间层,上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加Trizol 容量的50-60%。 (有机层和中间层是蛋白和DNA,如果需要提取,请联系我们索取提取方法)。


6.将水样层转移到一干净的离心管中,加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10分钟。RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。 


7.在室温或者4°C 12,000 rpm 离心10分钟,弃上清。


8.加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用1mlTrizol用1ml75%乙醇对沉淀进行洗涤。


9.在室温或者4°C 12,000 rpm离心3分钟,弃上清,注意不要丢失RNA沉淀。

注意:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。


10.室温放置2-3分钟,晾干。加入30-100μl RNase free water,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。
注意:沉淀不要过分干燥,以免难于溶解。


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qPCR实验流程图

送样要求:

1. 细胞(≥106 )、新鲜动植物组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(总RNA>2μg,体积≥20μl,浓度≥100 ng/μl)。
2. 靶基因信息和背景资料:基因序列或GenBank Accession Number等,生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

提供服务:
引物探针设计合成,RNA提取,反转录,RNA电泳,引物筛选,上机定量检测。

提交结果:
原始数据(CT值和各种统计值,融化温度图,扩增曲线图,电泳图,柱状图)、数据分析结果及详细实验报告。