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总RNA提取试剂(Trizol)

总RNA提取试剂(Trizol)是一种即用型总RNA抽提试剂,可以快速提取人、动物、植物、酵母和细菌等不同组织或细胞的总RNA,对少量的50-100 mg组织和5×106细胞,以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。操作简单可同时处理多个的样品,所有的操作能在一小时内完成。

产品编号:R2101

产品规格:50ml/100ml

产品价格:250/450

包装:

储存条件:4℃

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总RNA提取试剂(Trizol)

Total RNA Extraction Reagent(Trizol)


包装规格:

R2101-50 总RNA提取试剂(Trizol) 50mL 250
R2101-100 总RNA提取试剂(Trizol) 100mL 450
R2101-500 总RNA提取试剂(Trizol) 100ml×5 2020


本产品仅用于科研,禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。


产品介绍:
总RNA提取试剂,是广谱型总RNA提取试剂。 本试剂适用于动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中总RNA的提取。TRIzol中充分裂解样品的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后,会分成三层,RNA分布在上层上清水相中。收集上清水相后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。
可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

产品特点:
无污染:整套试剂盒采用RNase-Free处理。
适用广:适用于动物组织,植物组织,各种微生物和培养细胞等各类样品材料的RNA提取。
易操作:操作简便,提取过程仅需 30 分钟左右。 
高质量:有效保证RNA的完整性,回收RNA 效率高,纯度高,没有蛋白和其他杂质污染。OD260/OD280的比值可达1.9~2.2,可用于各种分子生物学实验。

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项) 
样品处理:
1.植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzol中迅速研磨,每50 ~ 100mg组织加入1ml TRIzol,混匀。注意:样品体积一般不要超过TRIzol体积的10%。
2.动物组织:取新鲜或-80°C冻存动物组织尽量剪碎,每30 ~ 100mg组织加入1ml TRIzol,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨成粉后,转入新的离心管中加入1ml TRIzol混匀。注意:样品体积一般不要超过TRIzol体积的10%。
3.贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,按培养板面积每10cm2加入1ml TRIzol,用移液器反复吹打,直到看不到明显的细胞团为止。TRIzol加入量不足会有DNA污染。
4.悬浮细胞:离心收集细胞。每5 ~ 10×106动物、植物和酵母细胞或每1×107细菌细胞加入1ml TRIzol混匀。用移液器反复吹打,直到看不到明显的细胞团为止。不需要洗涤,避免mRNA降解。
5.若提取细菌RNA,SpinPure™细菌RNA快速提取试剂盒(离心柱型)(目录号:2120);若提取血液或液体RNA,推荐TRI LS Reagent液体样品总RNA抽提试剂(TRIzol LS Reagent)(目录号:2107)。

提取步骤:
1.将处理后的样品在室温静置5~10分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。
2.可选步骤: 4°C 12,000rpm 离心10分钟,取上清转入一个新的RNase free的离心管中。(当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要额外的分离步骤。)
3.每1ml TRIzol加200μl氯仿。剧烈振荡15秒并将其在室温下静置3分钟。
4.在4°C 12,000rpm 离心10分钟,样品会分成三层:下层有机层,中间蛋白层和上清水相层 ,RNA存在于上清水相层中。
5.将上清水相转移到新的离心管中,加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温静置10分钟。(不要吸取沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁,注意不能将其带入离心管中。)
6.4°C 12,000 rpm 离心10分钟,弃上清,此时在管底形成胶装沉淀。
7.每使用1ml TRIzol用1ml 75%乙醇对沉淀进行震动涡旋洗涤。
8.4°C 12,000 rpm离心3分钟,弃上清(不要吸取RNA沉淀)。剩余的少量液体可短暂离心,然后用移液器 吸出。
9.室温静置2 ~ 3分钟。加入30 ~ 100μl Rnase-free H2O,充分溶解RNA。沉淀不要过分干燥,以免难于溶解。洗脱后的RNA可立即使用或保存在-80°C。


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Trizol

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qPCR实验流程图

送样要求:

1. 细胞(≥106 )、新鲜动植物组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(总RNA>2μg,体积≥20μl,浓度≥100 ng/μl)。
2. 靶基因信息和背景资料:基因序列或GenBank Accession Number等,生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

提供服务:
引物探针设计合成,RNA提取,反转录,RNA电泳,引物筛选,上机定量检测。

提交结果:
原始数据(CT值和各种统计值,融化温度图,扩增曲线图,电泳图,柱状图)、数据分析结果及详细实验报告。