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组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒(离心柱型)

组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒,适用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA和Protein,不需要使用DNase消化,RNA可直接用于反转录PCR,荧光定量PCR。无需有毒的苯酚/氯仿抽提/乙醇沉淀等步骤,基因组DNA清除柱有效清除gDNA残留,无需DNase消化,无DNA残留,也无杂质残留,RNA纯度极高,适合于对纯度要求很高的下游实验,如real-time RT-PCR和RNA-Seq。

产品编号:2106

产品规格:50次/200次

产品价格:1890/7180

包装:

储存条件:4℃

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组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒(离心柱型)

Tissue&Cell RNA/DNA/Protein Kit


包装规格:

2106A 组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒(离心柱型) 20次 1050元
2106B 组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒(离心柱型) 50次 1890元
2106C 组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒(离心柱型) 200次 7180元


本产品仅用于科研,禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。


产品介绍:
组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒,可快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取DNA、RNA和Protein。无需苯酚、氯仿等有机试剂。用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶,通过基因组DNA吸附柱时,DNA会吸附在吸附柱内,而RNA和Protein会滤过,通过后续的多次柱漂洗的方式。可在60分钟左右,同时提取纯度高,没有杂质污染,互不干扰的DNA、RNA和Protein。

得到的RNA产物可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。基因组DNA也可用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。Protein可用于SDS-PAGE电泳或者western blot 等试验。

产品特点:
无污染:整套试剂盒采用RNase-Free处理。
特殊性:适用于动物组织和培养细胞,可同时提取互不干扰的总RNA和基因组DNA。
易操作:操作简便,提取过程仅需 60分钟左右。 
安全性:无需使用苯酚、氯仿等有机试剂。
吸附柱:含有特异性吸附柱。通过漂洗-离心-洗脱的步骤提取。
高质量:有效保证RNA/DNA/Protein的完整性,回收RNA /DNA/Protein效率高,纯度高,没有蛋白和其他杂质污染。可用于各种分子生物学实验。

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项) 
洗脱缓冲液EB在65°C~70°C水浴锅中预热,效果更佳。

样品处理:
1.动物组织:取新鲜或-80°C冻存动物组织尽量剪碎,加入350μl(< 20mg组织)或600μl (20 ~ 30mg组织)的裂解液RLT,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨成细粉后,取研磨组织细粉(20mg/30mg)转入装有350μl/600μl组织裂解液RLT的1.5ml离心管中,剧烈振荡混匀或者200μl吸头吹打混匀。
2.贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液RLT裂解细胞,按培养板面积每10cm2加1ml裂解液RLT,用取样器吹打混匀。用移液器反复吹打, 直到看不到明显的细胞团为止。裂解液加入量不足会有DNA污染。
3.悬浮细胞:离心收集细胞。加入350μl裂解液RLT(<5×106细胞)或者600μl裂解液RLT(5×106 ~ 1×107细胞)。 用移液器反复吹打,直到看不到明显的细胞团为止。不需要洗涤,避免mRNA降解。

提取步骤:
1.将处理后的样品在室温静置5~10分钟,13,000rpm离心3分钟,会有杂质沉淀。
2.将上清液转入套有基因组DNA吸附柱DA的离心管中。(不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁,注意不能将其带入离心管中。)
3.13,000 rpm离心60秒,保留滤过液(RNA和Protein在过滤液中)、吸附柱DA(DNA在吸附柱中)。
(此时将分开实验,建议先提取RNA,吸附柱DA短时间可存放4°C度备用。Protein提取从RNA提取步骤5中分离。)

提取RNA步骤:
4.估计滤过液体积,加入等体积的70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇),立即吹打混匀。
5.将混合溶液(每次小于700μl)滴入套有吸附柱RA的离心管中,13,000 rpm离心30秒。(保留滤过液以备提取Protein)
6.将吸附柱RA套入新的离心管中,加700μl 去蛋白液RW1,室温静置1分钟,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
7.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。
8.重复步骤7一次。
9.将吸附柱RA放回收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应,弃掉废管。
10.取出吸附柱RA(避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液),放入新的RNase - free离心管中,在吸附膜的中间部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室温静置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。洗脱后的RNA可立即使用或保存在-80°C,防止降解。

提取DNA步骤:
11.在步骤3的吸附柱DA上加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
12.加入700μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
13.加入500μl漂洗液WB,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
14.将DNA吸附柱DA放入收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
15.取出DA吸附柱(避免吸附柱DA的底部碰到收集管里面的废液),放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB, 室温静置3 ~ 5分钟,12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱 中,室温静置2分钟,12,000rpm离心1分钟。洗脱后的DNA可立即使用或保存在-20°C,防止降解。

提取Protein步骤:
16.将步骤5的滤过液中加入滤过液等体积的缓冲液APP,涡旋振荡混匀,室温静置15分钟沉淀Protein。
17.13,000rpm离心5~10分钟,小心弃上清。加入500μl 70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇),颠倒后离心1分钟,留下蛋白沉淀,尽量将上清液体用移液器吸干净。
18.室温晾干沉淀5~10分钟,让乙醇挥发干净,以免下影响游试验。
19.将蛋白沉淀溶解于30~150μl 1×蛋白上样缓冲液或其它下游试验要求的缓冲液。
20.95°C放置5分钟溶解和变性蛋白,回复到室温,最高速离心1分钟。


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2. 专业的引物设计技能,保证qPCR引物的特异性;

3. 熟练的qPCR操作技能,保证完美的qPCR结果;

qPCR实验流程图

送样要求:

1. 细胞(≥106 )、新鲜动植物组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(总RNA>2μg,体积≥20μl,浓度≥100 ng/μl)。
2. 靶基因信息和背景资料:基因序列或GenBank Accession Number等,生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

提供服务:
引物探针设计合成,RNA提取,反转录,RNA电泳,引物筛选,上机定量检测。

提交结果:
原始数据(CT值和各种统计值,融化温度图,扩增曲线图,电泳图,柱状图)、数据分析结果及详细实验报告。