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组织细胞RNA提取试剂盒(离心柱型)

Tissue&Cell RNA Kit

包装规格：

产品介绍：
组织细胞RNA提取试剂盒，可快速提取动物细胞和易裂解动物组织总RNA。可在30分钟内，无需使用苯酚、氯仿等有机试剂，采用独特的裂解液可以迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，含有独特的基因组DNA清除柱，结合多次柱漂洗的方式，可提取没有蛋白、细胞代谢物、基因组等杂质污染的高纯度、高质量的总RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

产品特点：
无污染：整套试剂盒采用RNase-Free处理。
特殊性：适用于提取动物组织和培养细胞总RNA。
易操作：操作简便，提取过程仅需 30 分钟左右。 
安全性：无需使用苯酚、氯仿等有机试剂。
吸附柱：含有特异性吸附柱。通过漂洗－离心－洗脱的步骤提取。
高质量：有效保证RNA的完整性，回收RNA 效率高，纯度高，没有蛋白和其他杂质污染。OD260/OD280的比值可达1.9~2.2，可用于各种分子生物学实验。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 
样品处理：
1.动物组织：取新鲜或－80°C冻存动物组织尽量剪碎，加入350μl（< 20mg组织）或600μl （20 ~ 30mg组织）的裂解液RLT Plus，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入合适裂解液RLT Plus混匀。
2.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液RLT Plus裂解细胞，按培养板面积每10cm²加1ml裂解液RLT Plus，用取样器吹打混匀。用移液器反复吹打 ，直到看不到明显的细胞团为止。裂解液加入量不足会有DNA污染。
3.悬浮细胞：离心收集细胞。加入350μl裂解液RLT Plus（<5×10⁶细胞）或者600μl裂解液RLT Plus（5×106 ~ 1×10⁷细胞）。 用移液器反复吹打，直到看不到明显的细胞团为止。不需要洗涤，避免mRNA降解。

提取步骤：
1.将处理后的样品在室温静置5~10分钟，13,000rpm离心3分钟，会有杂质沉淀。
2.将上清液转入套有基因组DNA清除柱的离心管中。不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁，注意不能将其带入离心管中。）
3.13,000 rpm离心60秒，保留滤过液（RNA在滤过液中）。
4.估计滤过液体积，加入等体积的70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇）立即吹打混匀。
5.将混合溶液（每次小于700μl）滴入套有吸附柱RA的离心管中，13,000 rpm离心30秒，弃掉废液。
6.加700μl 去蛋白液RW1，室温放置1分钟，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
7.加500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
8.重复步骤7一次。
9.将吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液），放入新的RNase-free离心管中，在吸附膜的中间部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。洗脱后的RNA可立即使用或保存在－80°C。

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