咨询热线:400-167-8986

联系我们

Q Q:11955 37948
电话:400-167-8986
手机1:185 1867 6727
手机2:173 0710 7886
订货:order@genenode.com
技术:service@genenode.com
网址:www.genenode.com



Exo-DNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)

Exo-DNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)

产品编号:A4602

产品规格:48次

产品价格:2400

包装:

储存条件:-20℃

  • 产品介绍
  • 相关产品
  • 技术文章
  • 文档下载
  • 产品咨询/下单

Exo-DNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)

包装规格:

A4602-48 Exo DNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型) 48T 2000元

用于DNA扩增,荧光检测


一. 原理概述:
本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下,重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA,在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下,侵入双链DNA模板;在侵入位点形成D-loop区域,并开始对DNA双链进行扫描;待找到与引物互补的目的区域后,复合体Rec/ssDNA解体的同时,聚合酶也结合到引物的3’末端,开始链的延伸。本试剂盒在39 ºC下,依赖核酸外切酶的作用,加入根据模版设计的特异的分子探针,使用荧光监测设备能实现对目标片段扩增过程的实时监控。


二. 产品特点:
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需20 mins)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。

可适用于各种品牌的荧光定量PCR仪、恒温荧光扩增仪器等荧光检测设备。

三. 引物设计:
1. 建议使用长度在30-35 bp的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;

2. 碱基排布随机性高,GC 含量在 30%-70%之间;

3. 引物设计避免形成二级结构而影响扩增;

4. 扩增子长度建议在150-300 bp,通常不超过500 bp。

四. 荧光探针设计:
在上下游引物中间,设计一段长度为 46-52nt 与目的片段互补的序列作为荧光探针;

探针序列不与特异性引物识别位点重叠,长度为46-52 nt,序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。


探针共有四个修饰位点:

1. 距离 5’端的 30-35 nt 的中部位置标记一个 dSpacer(四氢呋喃,THF),作为核酸外切酶的识别位点(任何碱基,无特殊要求);
2. THF 位点的上游的 T 碱基上标记一个荧光基团(如 FAM),下游在 T 碱基上标记一个淬灭基团(如BHQ1),两个基团的间距为 2-4 nt;
3. THF 距离 3’末端约 15 nt,并且 3’末端标记一个修饰基团,例如胺基、磷酸基团或 C3-spacer。



五. 试剂盒储存:
运输条件:低温运输;
储存条件:储存温度 ≤ -20 ºC,避光保存,避免重压、反复冻融;
产品有效期:12个月。 

六. 操作步骤:

提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀。
1).每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);1.  每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);
2.  每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针(引物和探针浓度为10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);
3.  向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为13.5 μL);
4.  最后向反应管中加入2.5 μL B Buffer并充分混合(对于多个反应,建议将B Buffer加至反应管的盖子内侧,上下颠倒反应管8-10次混匀);
5.  混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入荧光检测设备中。荧光检测程序设置为:恒温39 ºC;每30 s采集一次FAM通道(信号采集通道的选择与荧光探针设计一致)荧光值;反应时间20 min。
注:如使用ABI系列PCR仪,请务必于passive reference和quencher处均选择“none”。


*正对照反应单元体系配制:正对照模板加入2μL,引物与探针加入4.6 μL正对照引物探针Mix(已包含探针和上/下游引物),其他组分参照体系配制。


注意事项:
1.由于试剂盒灵敏度非常高,在进行反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2.试剂盒保质期12个月。每次使用时,请取出实验所需的MIRA反应单元的数量,置于冰浴条件下并在8小时内使用;剩余部分,请置于存储条件下。