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RT-Exo RNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)

RT-Exo RNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)

产品编号:A4612

产品规格:48次

产品价格:2500

包装:

储存条件:-20℃

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RT-Exo RNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)

包装规格:

A4612-50 RT-Exo RNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型) 48T 2100元

RNA扩增,荧光检测

一. 原理概述:
本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下,特殊修饰的反转录酶利用特异性引物DNA和模板RNA合成cDNA链,反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。本试剂盒在42 ºC下,依赖核酸外切酶的作用,加入根据模版设计的特异的分子探针,使用荧光监测设备能实现对目标片段扩增过程的实时监控。适用于实验室级别的RNA扩增以及其他检测用途的RNA扩增使用。

二. 产品特点:
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需20 mins)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。
可适用于各种品牌的荧光定量PCR仪,恒温荧光扩增仪器等荧光检测设备。

三. 引物设计:
1. 建议使用长度在30-35 bp的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;
2. 碱基排布随机性高,GC 含量在 30%-70%之间;
3. 引物设计避免形成二级结构而影响扩增;
4. 扩增子长度建议在150-300 bp,通常不超过500 bp。

四. 荧光探针设计:
在上下游引物中间,设计一段长度为 46-52nt 与目的片段互补的序列作为荧光探针;
探针序列不与特异性引物识别位点重叠,长度为46-52 nt,序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。

探针共有四个修饰位点:
1. 距离 5’端的 30-35 nt 的中部位置标记一个 dSpacer(四氢呋喃,THF),作为核酸外切酶的识别位点(任何碱基,无特殊要求);
2. THF 位点的上游的 T 碱基上标记一个荧光基团(如 FAM),下游在 T 碱基上标记一个淬灭基团(如BHQ1),两个基团的间距为 2-4 nt;
3. THF 距离 3’末端约 15 nt,并且 3’末端标记一个修饰基团,例如胺基、磷酸基团或 C3-spacer。


五. 试剂盒储存:
运输条件:低温运输;
储存条件:储存温度 ≤ -20 ºC,避光保存,避免重压、反复冻融;
产品有效期:12个月。 

六. 操作步骤:

提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀。
1).每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);
2).每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针(引物和探针浓度为10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);
3).向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为13.5 μL);
4).最后向反应管中加入2.5 μL B Buffer并充分混合(对于多个反应,建议将B Buffer加至反应管的盖子内侧,上下颠倒反应管8-10次混匀);
5).混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入荧光检测设备中。荧光检测程序设置为:恒温42 ºC;每30 s采集一次FAM通道(信号采集通道的选择与荧光探针设计一致)荧光值;反应时间20 min。
注:如使用ABI系列PCR仪,请务必于passive reference和quencher处均选择“none”。