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FFPE石蜡包埋组织RNA提取试剂盒(离心柱型)

FFPE Tissue RNA Kit

包装规格：

FFPE石蜡包埋组织RNA提取试剂盒，适用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取总RNA。可在60分钟左右，无需使用苯酚、氯仿等有机试剂，采用独特的裂解液可以迅速裂解细胞，结合高效的gDNA 过滤技术，可高效去除基因组DNA，结合多次柱漂洗的方式，可提取没有蛋白、细胞代谢物等杂质污染的高纯度、高质量的总RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

产品特点：
无污染：整套试剂盒采用RNase-Free处理。
特殊性：适用于提取石蜡包埋组织的总RNA。
易操作：操作简便，提取过程仅需 60 分钟左右。 
安全性：无需使用苯酚、氯仿等有机试剂。
吸附柱：含有特异性吸附柱。通过漂洗－离心－洗脱的步骤提取。
高质量：有效保证RNA的完整性，回收RNA 效率高，纯度高，没有蛋白和其他杂质污染。OD260/OD280的比值可达1.8~2.2，可用于各种分子生物学实验。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 
样品处理： 
1.修整去除过量包埋组织外石蜡，并切片成5~20μm厚切片（开始的2~3片抛弃不用）。
2.收集总厚度不超过40μm的石蜡切片到一个1.5~2ml离心管（例如2片20μm、4片10μm、8片5μm的石蜡切片）
3.加入1ml 100%二甲苯，涡旋振荡10秒。立即短暂离心，把样品组织全部浸入到二甲苯。
4.50°C水浴3分钟，20°C~25°C最高速离心2分钟，收集组织到管底。
5.小心用移液器吸弃上清二甲苯，注意不要吸到沉淀。
6.加入1ml无水乙醇，涡旋振荡，最高速离心2分钟，吸弃上清乙醇，注意不要吸到沉淀
7.重复步骤6一次。
8.室温或者37°C 晾干乙醇10分钟或直到所有乙醇挥发干。

提取步骤：
1.加入150μl裂解液PKD中，重悬吹打或者涡旋振荡充分重悬组织沉淀，短暂离心收集上清液体，加10μl 蛋白酶K，吹打混匀。
2.55°C孵育15分钟，然后80°C孵育15分钟。
55°C孵育后，可以将离心管取出放置在室温，等水浴锅温度升到80°C后再放入水浴锅，精确的孵育15分钟。
3.加入320μl结合液RBC，充分吹打混匀调节结合条件。立刻将混合溶液转入一个套有基因组DNA清除柱的离心管中， 14,000 rpm离心60秒，保留滤过液（RNA在滤过液中）。
4.加入720μl无水乙醇到滤过液中，立即吹打混匀，不要离心。
5.将混合溶液（每次小于700μl，可分两次加入）转入套有吸附柱RA的离心管中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm离心30秒，弃掉废液。
6.加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
7.重复步骤7一遍。
8.将吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
9.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液），放入新的RNase-free离心管中，在吸附膜的中间部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室温静置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。取得RNA后，将RNA溶液保存在－80°C，防止降解。

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