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First Strand cDNA Synthesis Kit(第一链反转录试剂盒)

First Strand cDNA Synthesis Kit(第一链反转录试剂盒)

产品编号:4202

产品规格:50T/100T

产品价格:700/1200

包装:

储存条件:F

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First Strand cDNA Synthesis Kit(第一链反转录试剂盒)


产品规格:

货号 产品名称 规格 目录价
4202A
First Strand cDNA Synthesis Kit(第一链反转录试剂盒)
50T 700
4202B
First Strand cDNA Synthesis Kit(第一链反转录试剂盒)
100T 1200
4202C
First Strand cDNA Synthesis Kit(第一链反转录试剂盒)
1000T 10000

产品介绍:

      本制品以RNA为模板,采用预混合技术,用5 × TRUE Reaction Mix(已经预混合了TRUEscript Hˉ RTase/RNase Inhibitor Mix)高效合成第一链cDNA,操作简单。制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶TRUEscript Hˉ RTase。 野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失,与M-MuLV 相比,具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。


产品特点:
合成cDNA片段长度最高可达12 kb。

适用范围:
第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。

使用方法:
第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例) :
1.加入:

Components Volume
Total RNA/mRNA 50 ng-5 μg/5-500 ng
反转录引物
1 μl
5× RT Reaction Mix  4 μl
RNase free H2O to final volume  20 μl
注:真核生物mRNA带Poly A尾和一些带Poly A尾的病毒RNA,反转录引物可以选择Oligo(dT)18(0.5 μg /μl),原核生物或者不带Poly A尾的病毒mRNA无法使用Oligo dT,因此反转录引物只能选择Random Primer N6(0.1 μg/μl) 。 


2. 轻轻混匀
如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)42℃孵育30-50 min(如产物用于qPCR,42℃孵育15-20 min)


如用Random Primer,25℃孵育10 min,42℃孵育30-50 min(如产物用于qPCR,42℃孵育15-20 min)

3. 85℃加热5 min 失活TRUEscript Hˉ RTase。

4. 得到的cDNA产物可立即用于PCR或qPCR反应,或在-20℃保存,并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70℃保存。cDNA应避免反复冻融。

RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。丰度高的可以酌情适当稀释cDNA后使用。


注意事项:
1.避免RNase污染。
2.为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3.4 × gDNA Eraser Mix 、5 × TRUE RT MasterMix  非常粘稠,溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请点甩离心后使用,并且避免吸头外壁沾附损失。