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高产量质粒小量快速提取试剂盒(离心柱型)

HighYield Plasmid Mini Extraction Kit(SpinColumn)

包装规格：

产品介绍：

本试剂盒采用独特的高产量SDS-碱裂解法配方裂解细胞，质粒产量提高1-2倍。离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：
1.特殊改进的高产量缓冲液配方可以把质粒产量提高1-2倍。
2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。
3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

适用范围：
本试剂盒适用菌株为XL-1 Blue、Top10和DH5α等核酸酶含量低缺陷型菌株，同时核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。

操作步骤：
提示：
第一次使用前请先在漂洗液Buffer WB瓶和去蛋白液Buffer PE瓶中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
将RNase A全部加入溶液P1中，混匀，每次使用后置于2-8℃保存。

1.取1.5-5 mL过夜培养的菌液，12,000 rpm离心30秒，尽可能的倒干上清，收集菌体。
收集超过1.5 mL菌液， 可以离心弃上清后，在同一个1.5 mL管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。

2.用250 µL溶液P1重悬菌体沉淀，涡旋振荡至彻底悬浮。
如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

3.加250 µL的溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解，室温放置4分钟。
温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要准确的5分钟。

4.加250 µL溶液N3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm离心10分钟，小心取上清至新管，避免吸取到漂浮白色沉淀。
加入溶液N3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。
平衡液预处理吸附柱：
使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”

5.向上清中加入0.5体积异丙醇（约335 µL）后充分颠倒混匀后分两次（每次不超过700 µL）转入吸附柱Spin AC中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。直到所有混合溶液通过此吸附柱。

6.可选步骤:加入500 µL去蛋白液Buffer PE，12,000 rpm离心30秒，弃废液。
此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质，如所用菌株为JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株，核酸酶含量丰富，应加此步骤；如所用菌株为XL-1 Blue、Top10和DH5α等缺陷型菌株，核酸酶含量低，则可略过此步骤。

7.加入600 µL漂洗液Buffer WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm离心30秒，弃掉废液。再加入600 µL漂洗液Buffer WB，重复漂洗一次。

8.将吸附柱Spin AC放回空收集管中，12,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

9.取出吸附柱Spin AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50-100 µL洗脱缓冲液Buffer EB，室温放置2分钟，12,000 rpm离心1分钟。如果需要较多量质粒，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于30 µL，体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量。