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实验常用培养基的配制方法

1、Ampicillin（100mg/ml）

□组份浓度 100mg/ml Ampicillin （100mg/ml）              

□配制量  50mL
□配置方法 

1. 称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

2、IPTG（24mg/ml）

□组份浓度  24mg/mL IPTG（24mg/mL）            

□配制量   50mL
配置方法  

1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。 
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

3、X- Gal（20mg/ml）

□组份浓度 20mg/mL X- Gal （20mg/mL）             

□配制量  50mL
□配置方法 

1. 称取1gX-Gal置于50mL离心管中。
2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。

4、LB培养基

□组份浓度

1%（W/V）	Tryptone
0.5%（W/V）	Yeast Extract
1%（W/V）	NaCl

□配制量  1L
□配置方法 

1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone	10g
Yeast Extract	5g
NaCl	10g

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。

5、LB/Amp培养基     

□组份浓度  

1％（W/V）	Tryptone
0.5％（W/V）	Yeast Extract
1％（W/V）	NaCl
0.1mg/mL	Ampicillin

□配制量  1L
□配置方法 

1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone	10g
Yeast Extract	5g
NaCl	10g

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 加去离子水将培养基定容至1L。 
5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合，4℃保存。

6、TB培养基            

□组份浓度     

1.2％（W/V）	Tryptone
2.4％（W/V）	Yeast Extract
0.4％（V/V）	Glycerol
17mM	KH2PO4
72mM	K2HPO4

□配制量1L

□配置方法 

1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和12.54g K2HPO4于90ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100ml，高温高压灭菌。
2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 

Tryptone	12g
Yeast Extract	24g
Glycerol	4mL

3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6.4℃保存。

7、TB/Apm培养基   

□组份浓度              

1.2％（W/V）	Tryptone
2.4％（W/V）	Yeast Extract
0.4％（V/V）	Glycerol
17mM	KH2PO4
72mM	K2HPO4
0.1mg/mL	Ampicillin

□配制量1L

□配置方法

1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。 
2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone	12g
Yeast Extract	24g
Glycerol	4mL

3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。
6. 均匀混合后4℃保存。

8、SOB培养基        

□组份浓度                                   

2％（W/V）	Tryptone
0.5％（W/V）	Yeast Extract
0.05％（W /V）	NaCl
2.5mM	KCl
10mM	MgCl2

□配制量1L
□配置方法

1. 配制250mMKCl溶液。 

在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后，定容至100mL。
2. 配制2MMgCl2溶液。

在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。

3. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。 

Tryptone	20g
Yeast Extract	5g
NaCl	0.5g

4. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

5 量取10mL250 mMKCl溶液，加入到烧杯中。 
6. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。
7. 加入去离子水将培养基定容至1L。
8. 高温高压灭菌后，4℃保存。
9. 使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。

9、SOC培养基         

□组份浓度                                     

2％（W/V）	Tryptone
0.5％（W/V）	Yeast Extract
0.05％（W /V）	NaCl
2.5mM	KCl
10mM	MgCl2
20mM	葡萄糖

□配制量 100mL
□配置方法

1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。
2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。

3.4℃保存。

10、2×YT培养基   

□组份浓度 

1.6％（W/V）	Tryptone
1％（W/V）	Yeast Extract
0.5％（W/V）	NaCl

□配制量   1L
□配置方法 

1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone	16g
Yeast Extract	10g
NaCl	5g

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH，调节pH值至7.0。
4. 加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后，4℃保存。

11、Φb×broth培养基

□组份浓度

2％（W/V）	Tryptone
0.5％（W/V）	Yeast Extract
0.5％（W/V）	MgSO4•7H2O

□配制量1L 

□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone	20g
Yeast Extract	5g
MgSO4•7H2O	5g

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。            

3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.5。
4. 加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后，4℃保存。

12、NZCYM培养基 

□组份浓度

0.5％（W/V）	Yeast Extract
0.1％（W/V）	Casamino Acid
1％（W /V）	NZ胺
0.5％（W /V）	NaCl
0.2％（W /V）	MgSO4•7H2O

□配制量   1L
□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Yeast Extract	5g
Casamino Acid	1g
NZ胺	10g
NaCl	5g
MgSO4•7H2O	2g

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后，4℃保存。 

13、NZYM培养基     

□组份浓度

0.5％（W/V）	Yeast Extract
1％（W /V）	NZ胺
0.5％（W /V）	NaCl
0.2％（W /V）	MgSO4•7H2O

 □配置方法

NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。

1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Yeast Extract	5g
NZ胺	10g
NaCl	5g
MgSO4•7H2O	2g

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 
3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 
4. 加水离子水将培养基定容至1L。 
5. 高温高压后，4℃保存。 

14、NZM培养基       

□组份浓度 

1％（W /V）	NZ胺
0.5％（W /V）	NaCl
0.2％（W /V）	MgSO4•7H2O

□配置方法 

NZM培养基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。

1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

NZ胺	10g
NaCl	5g
MgSO4•7H2O	2g

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 
3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 
4. 加水离子水将培养基定容至1L。 
5. 高温高压后，4℃保存。 

15、一般固体培养基的配制

□配置方法 

1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。

Agar（琼脂：铺制平板用）	15g/L
Agar（琼脂：配制顶层琼脂用）	7g/L
Agarose（琼脂糖：铺制平板用）	15 g/L
Agarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用）	7g/L

2.高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。  
3. 待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。
4. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。

16、LB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培养基 

□组份浓度                  

1％（W /V）	Tryptone
0.5％（W/V）	Yeast Extract
1％（W/V）	NaCl
0.1mg/mL	Ampicillin
0.024mg/mL	IPTG
0.04mg/mL	X-Gal
1.5％（W /V）	Agar

□配制量1L
□配置方法 1. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone	10g
Yeast Extract	5g
NaCl	10g

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 
4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15g Agar。
5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。 
7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。
8. 4℃保存平板。

17、TB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培养基

□组份浓度                    

1.2％（W /V）	Tryptone
2.4％（W/V）	Yeast Extract
0.4％（W/V）	Glycerol
17mM	KH2PO4
72mM	K2HPO4
0.1mg/mL	Ampicillin
0.024mg/mL	IPTG
0.04mg/mL	X-Gal
1.5％（W /V）	Agar

□配制量1L
□配置方法 

1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。 
2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone	12g
Yeast Extract	24g
Glycerol	4mL

3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15g Agar。
5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。 
7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。 
8. 4℃保存平板。