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酵母RNA提取试剂盒(With Lytic Enzyme)

Yeast RNA Kit(with Lytic Enzyme)

包装规格：

本产品仅用于科研，禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。

产品介绍：
酵母RNA提取试剂盒，适用于提取酵母细胞的总RNA。含有Lytic Enzyme包含20多种酶，可以溶解各种酵母细胞的细胞壁，经过独特的裂解液裂解细胞和灭活细胞RNA酶，结合多次柱漂洗的方式，在20分钟左右，即可提取没有蛋白、细胞代谢物等杂质污染的高纯度、高质量的总RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

产品特点：
无污染：整套试剂盒采用RNase-Free处理。
特殊性：适用于提取酵母的总RNA。
易操作：操作简便，提取过程仅需 20 分钟左右。 
安全性：无需使用苯酚、氯仿等有机试剂。
吸附柱：含有特异性吸附柱。通过漂洗－离心－洗脱的步骤提取。
高质量：有效保证RNA的完整性，回收RNA 效率高，纯度高，没有蛋白和其他杂质污染。OD260/OD280的比值可达1.9~2.2，可用于各种分子生物学实验。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 
样品处理：
1.收集2~3ml （约3×107细胞）处于对数生长期的酵母培养物到离心管中，12，000rpm离心30秒，尽可能吸弃上清。
2.加入300μl缓冲液SE中（已添加β-巯基乙醇），轻柔吹打细胞；根据酵母量加入50μl Lytic Enzyme，充分颠倒混匀，37°C水浴15~30分钟消化细胞壁，中间可颠倒数次帮助消化。
破壁效果不好会导致RNA产量低，可以加大lytic Enzyme 用量来提高酶工作浓度，还可以延长消化时间或者提高温度到45°C来提高效果，不适合Lytic Enzyme消化的酵母可选用其它方法如0.5mm玻璃珠涡旋击打 ，反复冻融等方式破除细胞壁。

提取步骤：
1.13,000 rpm离心1分钟，吸弃上清。
2.加入350μl裂解液RLT（已添加β-巯基乙醇），吹打混匀后剧烈振荡20秒，充分裂解。（如果有明显团块或者不溶物可以将裂解物13，000rpm离心3分钟,将裂解物上清全部转到一个新离心管再进行下一步。）
3.加入上清液等体积70%乙醇（DEPC水配制）立即吹打混匀。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁，注意不能将其带入离心管中。）
4.将混合溶液转入套有吸附柱RA的离心管中，13,000 rpm离心30~60秒，弃掉废液。
5.加700μl 去蛋白液RW1，室温放置30秒，12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
6.加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
7.重复步骤6一次。
8.将吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
9.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液），放入新的RNase-free离心管中，在吸附膜的中间部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室温静置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。取得RNA后，将RNA溶液保存在－80°C，防止降解。
 
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