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真菌RNA提取试剂盒(离心柱型)

Fungus RNA Kit

包装规格：

本产品仅用于科研，禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。

产品介绍：
真菌RNA提取试剂盒，适用于快速提取丝状真菌总RNA，可在25分钟左右，无需使用苯酚、氯仿等有机试剂提取总RNA。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，结合高效的gDNA过滤技术，配合Paway植物RNA助提剂可以结合多糖多酚并通过离心去除。可提取没有蛋白、细胞代谢物等杂质污染的高纯度、高质量的总RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

产品特点：
无污染：整套试剂盒采用RNase-Free处理。
特殊性：适用于提取特殊植物、丝状真菌的总RNA。
易操作：操作简便，提取过程仅需 25 分钟左右。 
安全性：无需使用苯酚、氯仿等有机试剂。
吸附柱：含有特异性吸附柱。通过漂洗－离心－洗脱的步骤提取。
高质量：有效保证RNA的完整性，回收RNA 效率高，纯度高，没有蛋白和其他杂质污染。OD260/OD280的比值可达1.9~2.2，可用于各种分子生物学实验。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
根据一些特别复杂的样品使用裂解液RLT提取失败或者产量很低想提高产量的情况下，可以选择尝试使用裂解液CLB，测试的松针、丹参叶、胡杨叶、番茄叶表明可以提高产量一倍甚至数倍。

裂解液RLT样品处理：
取 50~100 mg植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末，加入1ml裂解液RLT和100μl Paway，涡旋剧烈震荡混匀。注意：由于植物多样性非常丰富，而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的RNA 含量都不相同，请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。
1.将匀浆裂解液剧烈震动15~20秒，13,000rpm离心5~10分钟。会有杂质沉淀。
2.将上清液转入新的离心管中，加入上清液0.5倍体积的无水乙醇，立即吹打混匀。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁，注意不能将其带入离心管中。）

裂解液CLB样品处理：
取 50~100 mg植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末，加入1ml裂解液CLB（已添加β-巯基乙醇），涡旋剧烈震荡混匀。注意：由于植物多样性非常丰富，而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的RNA 含量都不相同，请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。
（依据样品需求，可将β-巯基乙醇至终浓度提高至10~20%。）
1.65°C水浴5~10分钟，中间偶尔颠倒1~2次帮助裂解。
2.将裂解物13,000 rpm离心10分钟，会有杂质沉淀。
3.将上清液转入新的离心管中，加入0.5倍上清体积的无水乙醇，立即吹打混匀。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁，注意不能将其带入离心管中。）

提取步骤：
3.将混合溶液（每次小于720μl，可分两次加入）滴入套有基因组清除柱的离心管中，13,000 rpm离心2min，弃掉废液。
4.将基因组DNA清除柱（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液），放入新的离心管中，加500μl裂解液RLT Plus，13,000 rpm 离心30秒，收集滤液（RNA在滤液中）。在滤液中加入0.5倍滤液体积的无水乙醇，立即吹打混匀。
5.将混合溶液（每次小于720μl，可分两次加入）滴入套有吸附柱RA的离心管中，13,000 rpm离心2min，弃掉废液。
6.加700ul去蛋白液RW1，室温放置1分钟，13,000rpm离心30秒，弃掉废液。
7.加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇），13,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
8.重复步骤5一次。
9.将吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液），放入新的RNase-free离心管中，在吸附膜的中间部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O，室温静置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟，取得RNA后，将RNA溶液保存在－80°C，防止降解。

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