磁珠法酵母DNA提取试剂盒
MagBeads gDNA Extraction Kit for Yeast
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MA1620-50
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磁珠法酵母DNA提取试剂盒
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50T
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940元
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MA1620-100
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磁珠法酵母DNA提取试剂盒
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100T
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1500元
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MA1620-200
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磁珠法酵母DNA提取试剂盒
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200T
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2700元
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MA1620-32
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磁珠法酵母DNA提取试剂盒(预封装)
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32T
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940元
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MA1620-96
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磁珠法酵母DNA提取试剂盒(预封装)
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96T
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2260元
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备注：新货号MA1620，旧货号MD2520。
【重要声明】本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读本说明书，并严格按照操作步骤进行实验。
一.试剂盒组成、储存、稳定性：
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Contents
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Storage
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MA1620-‑50
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MA1620-‑100
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50T
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100T
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Buffer YB
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RT
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10 mL
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20 mL
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Buffer CB
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RT
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21 mL
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42 mL
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Buffer WB
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RT
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25 mL
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50 mL
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RT
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75 mL
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3 x 50 mL
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Buffer EB
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RT
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15 mL
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20 mL
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Lytic Enzyme(可选)
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-20℃
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2.5 mL
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2 x 2.5 mL
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蛋白酶K溶液 20mg/mL
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-20℃
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1 mL
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2 mL
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MagBeads
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4℃
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1 mL
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2 mL
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备注：
1. Buffer WB第一次使用前按说明加指定量乙醇；
2. MagBeads 保存温度4‑8℃冷藏，避免冷冻，实验开始前将MagBeads静置到室温，使用前需充分振荡至分散均匀。
二.保存条件：
本试剂盒在室温(15°C‑25°C)干燥条件下可保存12个月，Proteinase K (20mg/mL)需单独‑20℃低温保存。
三.自备试剂与设备：
无水乙醇，Sorbitol buffer( 1M 山梨醇， 0.1M Na
2EDTA，14 mM β‑巯基乙醇)；
漩涡振荡器、恒温水浴锅(或金属浴)、磁力架、离心机、组织匀浆器或组织研磨仪，吸头、移液器、离心管等；
四.产品简介：
本试剂盒基于功能性生物磁珠的特异性吸附原理，通过优化的缓冲液系统，实现从多种酵母培养物中快速分离纯化高质量基因组DNA。磁珠在高盐条件下选择性结合核酸，低盐条件下释放核酸，整个过程无需酚、氯仿等有毒有机试剂，操作安全便捷。提取的基因组DNA片段完整、纯度高，可直接用于PCR、荧光定量PCR、基因测序、酶切、Southern杂交等下游分子生物学实验。
五.产品特点：
1.安全无毒：替代传统酚/氯仿抽提，无有毒试剂使用，操作过程安全，对环境友好；
2.高效快速：酵母破壁后整个提取流程 30 分钟内完成，无需长时间离心或沉淀操作；
3.纯度优异：提取的 DNA 无蛋白、RNA 及杂质污染，可直接用于高通量测序、Southern‑blot 等高端实验；
4.吸附稳定：磁珠特异性吸附核酸，批次间吸附效果稳定，无明显差异；
5.洗脱友好：洗脱液 EB 不含螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。
六.适用范围：
适用于快速提取各种酵母基因组DNA。
七.注意事项：
1.样本处理需在超净台或生物安全柜中进行，穿戴防护衣物、手套和口罩，避免样本交叉污染；
2.Lytic Enzyme 为蜗牛酶甘油储液，质地粘稠，需小心取用；若酵母破壁效果不佳，可加大用量、延长 37℃温育时间或提高至 45℃，也可选用玻璃珠涡旋击打、反复冻融等方法破壁；
3.吸取磁珠时避免枪头触碰管壁，防止磁珠吸附残留；每次振荡后需瞬时离心(3000rpm，5秒)，将管壁和管盖的液体收集至管底；
4.洗涤步骤中，去除上清时枪头需贴近液面但避免接触磁珠，防止磁珠流失；洗涤后需确保乙醇完全挥发(观察磁珠表面无反光或裂隙)，但避免磁珠过度干燥(易导致DNA洗脱不完全)；
5.样本应避免反复冻融，否则会导致DNA片段断裂和提取量下降；洗脱液建议65℃预热，可提高DNA回收率；
6.所有耗材（离心管、枪头）需无菌无核酸酶，实验台面和移液器定期消毒。
八.操作步骤：(实验前请先阅读注意事项)
⚠吸取使用量的Sorbitol buffer加入0.2% β‑巯基乙醇，回复到室温备用。
1.取 1~3 毫升酵母培养物 (不超过 3×10
7 cells，早对数生长期最佳)，加入 2mL 离心管中，12,000 rpm 室温离心 30 秒，尽可能吸弃上清，收集菌体。若需收集更多菌液，可在同一离心管中重复离心、弃上清操作，直至收集足量菌体。
2.向收集的菌体中加入 300 μL Sorbitol buffer，轻柔吹打充分重悬细胞；再加入 50 μL Lytic Enzyme 储液，充分颠倒混匀，37℃温育 1~3 小时消化细胞壁，期间颠倒数次帮助消化。
如果破壁效果不好导致产量低，可以加大lytic Enzyme 用量来提高酶工作浓度，还可以延长消化时间或者提高温度到45℃来提高效果，不适合Lytic Enzyme消化的酵母可选用其它方法如0.5 mm玻璃珠涡旋击打、反复冻融等。玻璃珠法：向菌体中加入180 μL 缓冲液Buffer YB彻底悬浮菌体，加入0.1g直径为0.45‑0.55 mm的酸洗玻璃珠，涡旋振荡10分钟，静置几分钟让玻璃珠沉淀，小心吸取上清到一个新管后接后续步骤4。
3.破壁完成后，13,000 rpm 室温离心 1 分钟，尽可能吸弃上清，向管中加入 180 μL Buffer YB，充分吹打重悬细胞团。
4.向重悬的细胞团中加入 20 μL Proteinase K(20mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀，55℃水浴温育至细胞完全裂解（一般 15 分钟，过夜温育无不良影响），期间轻柔振荡数次帮助裂解。
可选去RNA步骤：若 RNA 残留较多，加Proteinase K(20mg/mL)前加入 20 μL 25mg/mL RNase A 溶液，振荡混匀，室温放置 5~10 分钟即可。
5.实验开始前将磁珠静置平衡到室温，MagBeads使用前需充分振荡至分散均匀，向含上清液离心管中加入20 μL MagBeads，再加入400 μL Buffer CB，数次颠倒混匀，或者使用移液器吹打至磁珠分散均匀，室温静置10分钟，期间每隔 2 分钟混匀一次，保持磁珠处于悬浮状态。
6.将离心管移至磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附后，吸弃上清。
7.加入600 μL Buffer WB，移开磁力架，数次颠倒混匀，或者使用移液器吹打至磁珠分散均匀，再将离心管移至磁力架上静置2 min，待上清清澈后，吸弃上清。该洗涤操作重复2次。
8.打开离心管盖，37℃干燥箱干燥5‑10 min，或室温放置5‑10 min，使乙醇完全挥发（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）。
9.移去磁力架，向1.5 mL离心管中加入50‑100 μL洗脱液Buffer EB，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，56℃水浴5‑10 min。
10.将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取含DNA上清液至新的Nuclease‑free 1.5 mL离心管中，即得到高纯度的基因组DNA。
11.DNA可以存放在2‑8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。
九.FAQ问题与解决方法：
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问题
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评论与建议
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DNA产量低
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1.某些种类酵母裂解困难：确认该酵母可被Lytic Enzyme裂解；可选用玻璃珠涡旋击打、煮沸、反复冻融等裂解方式；优先使用早对数生长期酵母。
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2.磁珠未充分混匀：使用前充分涡旋磁珠悬浮液，确保磁珠均匀分散。
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3.结合时间不足：延长结合时间至15分钟。
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4.洗脱不充分：增加洗脱液体积；延长56℃孵育时间至15分钟。
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5.磁珠过度干燥：缩短干燥时间至5分钟。
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DNA降解
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1.样品处理前妥善保存在‑20℃，样品处理量不要过量。
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洗脱DNA产量低
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1.蛋白质残留：增加裂解时间至30分钟；确保洗涤步骤充分。
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2.盐离子残留：增加Buffer WB洗涤次数。
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3.乙醇残留：延长干燥时间至10分钟。
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下游PCR反应失败
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1.DNA中存在抑制剂：增加洗涤次数；用洗脱液稀释DNA后使用。
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2.乙醇残留：确保干燥步骤充分。
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3.DNA浓度过低：减少洗脱体积，浓缩DNA。
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