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MagBeads Tissue/Cell gDNA Extraction Kit

包装规格：

MA1608-50	磁珠法组织/细胞DNA提取试剂盒	50T	540元
MA1608-100	磁珠法组织/细胞DNA提取试剂盒	100T	860元
MA1608-200	磁珠法组织/细胞DNA提取试剂盒	200T	1560元
MA1608-32	磁珠法组织/细胞DNA提取试剂盒(预封装)	32T	540元
MA1608-96	磁珠法组织/细胞DNA提取试剂盒(预封装)	96T	1300元

备注：新货号MA1608，旧货号MD2508。

【重要声明】本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读本说明书，并严格按照操作步骤进行实验。

一.试剂盒组成、储存、稳定性：

Contents	Storage	MA1608-50 50T	MA1608-100 100T
Buffer TL	RT	26 mL	52 mL
Buffer CB	RT	26 mL	52 mL
Buffer DW1	RT	31 mL	62 mL
Buffer DW2	RT	15 mL	30 mL
		45 mL	90 mL
Buffer IR	RT	3 mL	6 mL
Buffer EB	RT	15 mL	15 mL
Proteinase K(20mg/mL)	-20℃	1.8 mL	2 x 1.8 mL
MagBeads	4℃	1 mL	2 x 1 mL

备注：
1. Buffer DW2第一次使用前按说明加指定量乙醇；
2. MagBeads 保存温度4-8℃冷藏，避免冷冻，实验开始前将MagBeads静置到室温，使用前需充分振荡至分散均匀。

二.保存条件：
本试剂盒在室温(15°C-25°C)干燥条件下可保存12个月，Proteinase K (20mg/mL)需单独-20℃低温保存。

三.自备试剂与设备：
无水乙醇，1×PBS缓冲液(pH7.4)，超纯水；
漩涡振荡器、恒温水浴锅(或金属浴)、磁力架、离心机、组织匀浆器或组织研磨仪，吸头、移液器、离心管等；

四.产品简介：
本试剂盒基于功能性生物磁珠的特异性吸附原理，通过优化的缓冲液系统，实现从动物组织、培养细胞等样本中快速分离纯化高质量基因组DNA。磁珠在高盐条件下选择性结合核酸，低盐条件下释放核酸，整个过程无需酚、氯仿等有毒有机试剂，操作安全便捷。提取的基因组DNA片段完整、纯度高，可直接用于PCR、荧光定量PCR、基因测序、酶切、Southern杂交等下游分子生物学实验。

五.产品简介：
1.高效快速：整个实验流程1小时内完成，无需长时间离心或沉淀；
2.安全无毒：替代传统酚/氯仿抽提，操作过程安全，对环境友好；
3.纯度优异：提取的DNA A260/A280比值1.7-1.9，无蛋白、RNA污染，可直接用于高通量测序等高端实验；
4.通用性强：兼容组织、细胞等多种样本类型，无需更换试剂盒；

六.适用范围：
适用于快速提取动物组织(肝脏、脾脏、肾脏等)、贴壁细胞、悬浮培养细胞等。

七.注意事项：
1.样本处理需在超净台或生物安全柜中进行，穿戴防护衣物、手套和口罩，避免样本交叉污染；
2.使用前检查试剂状态：Buffer TL若有沉淀，可置于37℃水浴溶解后混匀；磁珠悬液使用前需充分振荡10-15秒，确保磁珠均匀分散；
3.吸取磁珠时避免枪头触碰管壁，防止磁珠吸附残留；每次振荡后需瞬时离心(3000rpm，5秒)，将管壁和管盖的液体收集至管底；
4.洗涤步骤中，去除上清时枪头需贴近液面但避免接触磁珠，防止磁珠流失；洗涤后需确保乙醇完全挥发(观察磁珠表面无反光或裂隙)，但避免磁珠过度干燥(易导致DNA洗脱不完全)；
5.样本应避免反复冻融，否则会导致DNA片段断裂和提取量下降；洗脱液建议65℃预热，可提高DNA回收率；
6.所有耗材（离心管、枪头）需无菌无核酸酶，实验台面和移液器定期消毒。

八.操作步骤：(实验前请先阅读注意事项)
1.组织培养细胞
a.收集约105-106悬浮细胞到一个1.5 mL离心管；对于贴壁细胞，应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。
b.13,000 rpm离心10秒，使细胞沉淀下来。弃上清，留下细胞团和大约10-20 µL残留的液体。
c.加200 µL 1 x PBS（自备）重悬洗涤细胞，13,000 rpm离心10秒，使细胞沉淀下来。完全吸弃上清, 将细胞沉淀重悬于500 µL Buffer TL中。
d.加入20 µL Proteinase K (20 mg/mL)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀，在70℃放置15-20 min，期间每5min振荡一次。
可选做步骤: 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可以在加入500 µL Buffer TL前加20 µL RNase A (25mg/mL)溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。
e.接操作步骤项下3。

2.动植物组织(例如鼠肝脑或者鼠尾)
a.将20-50 mg新鲜或者解冻的组织用解剖刀切成小碎块(切成小块可以提高产量)或者在液氮中研磨组织成细粉后，转入装有500 µL Buffer TL的1.5 mL离心管中， 用大口径枪头吹打混匀。
若采用低温组织研磨仪，批量研磨组织样品，选用无酶研磨管，在样品中加入100 µL Buffer TL，和4-5颗4 mm无酶锆珠(实验测试后选择合适锆珠尺寸和锆珠数量)，液氮浸泡冷冻研磨管后上机研磨，复杂难研磨样品需要多次液氮浸泡，多次上机研磨至组织样品为粉末状态，研磨过程中确保样本始终处于低温状态，研磨完成后加入400 µL Buffer TL。
b.加入20 µL Proteinase K(20mg/mL)，立刻涡旋振荡，充分混匀。
c.将裂解物放置在65℃水浴1-3小时或者直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
可选步骤: 如果RNA残留较多需要去除RNA，可在完成步骤c后加20 µL RNase A (25mg/mL)溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。
d.接操作步骤项下3。
3.加入50 μL Buffer IR，立刻颠倒混匀15秒，在冰上静置3分钟，13,000 rpm 4℃离心5 min，吸取上清液500 μL到新的1.5 mL离心管中。
4.实验开始前将磁珠静置平衡到室温，MagBeads使用前需充分振荡至分散均匀，向含上清液离心管中加入20 μL MagBeads，再加入500 μL Buffer CB，数次颠倒混匀，或者使用移液器吹打至磁珠分散均匀，室温静置10分钟，期间每隔 2 分钟混匀一次，保持磁珠处于悬浮状态。
5.将离心管移至磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附后，吸弃上清。
6.加入600 μL DW1，移开磁力架，数次颠倒混匀，或者使用移液器吹打至磁珠分散均匀，再将离心管移至磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附后，小心吸弃全部上清。
7.加入600 μL DW2，移开磁力架，数次颠倒混匀，将离心管置于磁力架上，反复颠倒磁力架，静置磁力架磁吸2 min，待磁珠完全吸附后，小心吸弃全部上清。该洗涤操作重复1次。
8.打开离心管盖，将离心管置于磁力架上，室温开盖干燥 5 ~10 min 至无乙醇残留（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）。
9.移去磁力架，向1.5 mL离心管中加入50-100 μL Buffer EB，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，56℃水浴5 ~10 min。
10.将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取含DNA上清液至新的Nuclease-free 1.5 mL离心管中，即得到高纯度的基因组DNA。
11.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

九.FAQ问题与解决方法：

问题	评论与建议
DNA 产量低	1样本量不足或样本质量差，使用新鲜采集的组织或细胞样本。
	2.磁珠未充分混匀，使用前充分涡旋磁珠悬浮液，确保磁珠均匀分散。
	3.结合时间不足，延长结合时间至 15 分钟。
	4.洗脱不充分，增加洗脱液体积；延长 56℃孵育时间至15分钟。
	5.磁珠过度干燥，缩短干燥时间至 5 分钟。
DNA 纯度低	1.蛋白质残留，增加裂解时间10-30 分钟；确保洗涤步骤充分。
	2.盐离子残留，增加洗涤液 DW2 的洗涤次数。
	3.乙醇残留，延长干燥时间至 10 分钟。
DNA 降解	1.样本采集后保存不当，样本采集后尽快提取，或 - 20℃冻存。
	2.操作过于剧烈，避免过度涡旋，轻柔操作。
磁珠团聚	1.磁珠保存不当，2-8℃保存，使用前充分涡旋混匀。
	2.缓冲液温度过低，所有缓冲液使用前室温平衡。
下游 PCR 反应失败	1.DNA 中存在抑制剂，增加洗涤次数；用洗脱液稀释 DNA 后使用。
	2.乙醇残留，确保干燥步骤充分。
	3.DNA 浓度过低，减少洗脱体积，浓缩 DNA。