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磁珠法凝固血基因组DNA提取试剂盒
MagBeads gDNA Extraction Kit for Coagulated Blood

包装规格：

MA1607-50	磁珠法凝固血基因组DNA提取试剂盒	50T	620元
MA1607-100	磁珠法凝固血基因组DNA提取试剂盒	100T	1000元
MA1607-200	磁珠法凝固血基因组DNA提取试剂盒	200T	1800元
MA1607-32	磁珠法凝固血基因组DNA提取试剂盒(预封装)	32T	620元
MA1607-96	磁珠法凝固血基因组DNA提取试剂盒(预封装)	96T	1490元

备注：新货号MA1607，旧货号MD2507。

【重要声明】本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读本说明书，并严格按照操作步骤进行实验。

一.试剂盒组成、储存、稳定性：

Contents	Storage	MA1607-50	MA1607-100
		50T	100T
10 x RBC Lysis Buffer	RT	16 mL	32 mL
Buffer TL	RT	21 mL	42 mL
Buffer CB	RT	21 mL	42 mL
Buffer DW1	RT	31 mL	62 mL
Buffer DW2	RT	15 mL	30 mL
	RT	45 mL	90 mL
Buffer IR	RT	2.1 mL	4.2 mL
Buffer EB	RT	6 mL	12 mL
Proteinase K(20mg/mL)	-20℃	1 mL	2 x 1 mL
MagBeads	4℃	1 mL	2 x 1 mL

备注：
1. Buffer DW2第一次使用前按说明加指定量乙醇；
2. MagBeads 保存温度4-8℃冷藏，避免冷冻，实验开始前将MagBeads静置到室温，使用前需充分振荡至分散均匀。

二.保存条件：
本试剂盒在室温(15°C-25°C)干燥条件下可保存12个月，Proteinase K (20mg/mL)需单独-20℃低温保存。

三.自备试剂与设备：
无水乙醇，超纯水；
漩涡振荡器、恒温水浴锅(或金属浴)、磁力架、离心机、组织匀浆器或组织研磨仪，吸头、移液器、离心管等；

四.产品简介：
本试剂盒基于功能性生物磁珠的特异性吸附原理，通过优化的缓冲液系统，实现从凝固血样本中快速分离纯化高质量基因组DNA。磁珠在高盐条件下选择性结合核酸，低盐条件下释放核酸，整个过程无需酚、氯仿等有毒有机试剂，操作安全便捷。提取的基因组DNA片段完整、纯度高，可直接用于PCR、荧光定量PCR、基因测序、酶切、Southern杂交等下游分子生物学实验。

五.产品特点：
1.高效快速：整个实验流程1小时内完成，无需长时间离心或沉淀；
2.安全无毒：替代传统酚/氯仿抽提，操作过程安全，对环境友好；
3.纯度优异：提取的DNA A260/A280比值1.7-1.9，无蛋白、RNA污染，可直接用于高通量测序等高端实验；
4.灵活便捷：支持手工操作，也可适配自动化核酸提取仪，满足不同实验规模需求。

六.适用范围：
适用于快速提取凝固血块基因组DNA。

七.注意事项：
1.样本处理需在超净台或生物安全柜中进行，穿戴防护衣物、手套和口罩，避免样本交叉污染；
2.使用前检查试剂状态：Buffer TL和Buffer CB若有沉淀，可置于37℃水浴溶解后混匀；磁珠悬液使用前需充分振荡10-15秒，确保磁珠均匀分散；
3.吸取磁珠时避免枪头触碰管壁，防止磁珠吸附残留；每次振荡后需瞬时离心(3000rpm，5秒)，将管壁和管盖的液体收集至管底；
4.洗涤步骤中，去除上清时枪头需贴近液面但避免接触磁珠，防止磁珠流失；洗涤后需确保乙醇完全挥发(观察磁珠表面无反光或裂隙)，但避免磁珠过度干燥(易导致DNA洗脱不完全)；
5.样本应避免反复冻融，否则会导致DNA片段断裂和提取量下降；洗脱液建议65℃预热，可提高DNA回收率；
6.所有耗材（离心管、枪头）需无菌无核酸酶，实验台面和移液器定期消毒。

八.操作步骤：(实验前请先阅读注意事项)
1.取大约100 mg凝固血块的样品，将凝固血块放入研钵中，加液氮研磨成粉末。或者将凝固血块转入到圆底离心管中，加入4 mm研磨锆珠4-5颗，采用组织研磨仪高频震荡1-2分钟至血块匀浆，将匀浆液或液氮研磨凝固血粉末，转入2 mL离心管中。

2.加1×红细胞裂解液1.5 mL，颠倒6-8次，充分混匀，室温放置10分钟，期间应该颠倒轻弹混匀数次，帮助裂解红细胞，12,000 rpm离心1分钟，吸弃红色上清，留下管底白细胞团和大约10 µL的残留上清。

3.重复步骤2，再加1×红细胞裂解液1.5 mL，颠倒6-8次，充分混匀，室温放置10分钟，12,000 rpm离心1分钟，吸弃红色上清，留下管底白细胞团和大约10 µL的残留上清。

4.加入400 µL Buffer TL，再加入20 µL Proteinase K(20mg/mL)溶液立刻涡旋振荡，充分混匀。在65℃水浴20-30 min。溶液应变清亮（但颜色偏黑色）。
可选步骤，一般不需要: 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可以在加入Buffer TL前加20 µL RNase A(25mg/mL)溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

5.加入40 μL Buffer IR，颠倒混匀30s，在冰上静置3分钟，13,000 rpm 4℃离心5 min，吸取上清液400 μL到新的1.5 mL离心管中。

6.实验开始前将磁珠静置平衡到室温，MagBeads使用前需充分振荡至分散均匀，向含上清液离心管中加入20 μL MagBeads，再加入400 μL Buffer CB，数次颠倒混匀5 min，或者使用移液器吹打至磁珠分散均匀，保持磁珠处于悬浮状态。

7.将离心管移至磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附后，吸弃上清。

8.加入600 μL DW1，移开磁力架，数次颠倒混匀，或者使用移液器吹打至磁珠分散均匀，再将离心管移至磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附后，小心吸弃全部上清。

9.加入600 μL DW2，涡旋振荡30秒，将离心管置于磁力架上，反复颠倒磁力架，静置磁力架磁吸2 min，待磁珠完全吸附后，小心吸弃全部上清。该洗涤操作重复1次。

10.打开离心管盖，将离心管置于磁力架上，室温开盖干燥 5 ~10 min 至无乙醇残留（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）。

11.移去磁力架，向1.5 mL离心管中加入50-100 μL洗脱液Buffer EB，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，56℃水浴5 ~10 min。

12.将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取含DNA上清液至新的Nuclease‑free 1.5 mL离心管中，即得到高纯度的基因组DNA。

13.DNA可以存放在2‑8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

九.FAQ问题与解决方法：

问题	评论与建议
DNA 产量低	1样本量不足或样本质量差，使用新鲜凝固血液样本。
	2.磁珠未充分混匀，使用前充分涡旋磁珠悬浮液，确保磁珠均匀分散。
	3.结合时间不足，延长结合时间至 15 分钟。
	4.洗脱不充分，增加洗脱液体积；延长 56℃孵育时间至15分钟。
	5.磁珠过度干燥，缩短干燥时间至 5 分钟。
DNA 纯度低	1.蛋白质残留，增加裂解时间至 30 分钟；确保洗涤步骤充分。
	2.盐离子残留，增加洗涤液 DW2 的洗涤次数。
	3.乙醇残留，延长干燥时间至 10 分钟。
DNA 降解	1.样本采集后保存不当，样本采集后尽快提取，或 - 20℃冻存。
	2.操作过于剧烈，避免过度涡旋，轻柔操作。
磁珠团聚	1.磁珠保存不当，2‑8℃保存，使用前充分涡旋混匀。
	2.缓冲液温度过低，所有缓冲液使用前室温平衡。
下游 PCR 反应失败	1.DNA 中存在抑制剂，增加洗涤次数；用洗脱液稀释 DNA 后使用。
	2.乙醇残留，确保干燥步骤充分。
	3.DNA 浓度过低，减少洗脱体积，浓缩 DNA。