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多糖多酚复杂植物DNA提取试剂盒(离心柱型)

Complex Plant DNA Extraction Kit(SpinColumn)

包装规格：

一.产品简介：
本试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100 mg新鲜或20 mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

二.产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用优质特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

三.适用范围：
适用于快速提取各种植物组织、叶片、根茎和植株，植物组织细胞、真菌等样品的基因组DNA。

四.操作步骤：
提示：
第一次使用前请先在漂洗液Buffer WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
第一次使用前请先在缓冲液Buffer AP3/E中加入指定量无水乙醇!
实验前取所需适量缓冲液Buffer AP1放置在65℃预热，使用前加入β-巯基乙醇(自备)使至终浓度2%，例如每使用1 mL裂解液PL 中加入20 μL β-巯基乙醇。洗脱缓冲液Buffer EB在65℃~70℃水浴锅中预热。

1.取适量植物组织（新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg，可适当多取一些样品弥补粘在研钵上的损失）在研钵中加入液氮充分彻底碾磨成细粉。
研磨前，可准备一个1.5 mL 离心管，加入600 μL缓冲液Buffer AP1 ，12 μL β-巯基乙醇和6 μL RNase A(10 mg/mL)室温备用。

2.转移细粉（新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg）到前面准备的1.5 mL离心管（已加入600 μL缓冲液Buffer AP1，12 μL β-巯基乙醇和6 μL RNase A(10 mg/mL)旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。

3.65℃水浴20分钟，在水浴过程中颠倒离心管3-6次，混合样品。

4.加入200 μL缓冲液Buffer AP2，充分混匀，冰上放置5分钟，14,000 rpm离心5-10分钟，小心吸取上清到一个黄色垫圈过滤吸附柱，注意不要吸到界面物质，若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。

5.小心吸取上清液转移至黄色垫圈过滤吸附柱内，每次最多取700 μL，13,000 rpm离心1 min，转移收集管的滤过液到一个新的 1.5 mL 离心管。

6.计算上清量，加入1.5倍体积的AP3/E（请先检查是否已加入无水乙醇!），立即吹打混匀。
加入AP3/E可能会出现絮状沉淀，但不影响DNA提取。注意将AP3/E直接加入到上清并立即吹打混匀。
7.将上一步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加入一个吸附柱Spin AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液（先加650 μL离心，弃废液，再加入剩余的溶液，再次离心）。

8.加入600 μL漂洗液Buffer WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm离心30秒，弃掉废液。

9.加入600 μL漂洗液Buffer WB，12,000 rpm离心30秒，弃掉废液。

10.将吸附柱Spin AC放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

11.取出吸附柱Spin AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100 μL洗脱缓冲液Buffer EB（洗脱缓冲液可事先在 65-70℃水浴中预热），室温放置3-5分钟，12,000 rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置2分钟，12,000 rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果预计和需要产量高，可增大洗脱体积，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

12.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。