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昆虫基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)

Insect DNA Extraction Kit(SpinColumn)

包装规格：

一.产品简介：
采用独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

二.产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30kb -50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

三.适用范围：
适用于快速提取各种昆虫，软体动物，节肢动物等样品细胞/组织基因组DNA

四.操作步骤：
提示：第一次使用前请先在漂洗液Buffer WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

1.新鲜或者解冻的昆虫组织样品在液氮中研磨成细粉后或者用解剖刀切成小碎块（切成微块可以提高产量）后取20-50 mg，转入装有180 μL昆虫组织裂解液Buffer TL的1.5 mL离心管中， 用大口径枪头吹打混匀。

2.加入30 μL的蛋白酶K溶液(20mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

3.将裂解物放置在55℃水浴1-3小时或者直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
可选做步骤： 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在完成步骤c后加20 μL RNase A(25mg/mL)溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。

4.加入200 μL结合液Buffer CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。

5.冷却后加100 μL异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

6.用1 mL的枪头吸取混合物，将混合物加入一个吸附柱Spin AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液。
如果有不溶组织物可能堵住枪头，可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物；如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去，该做法是为了去除不溶物，以免堵塞离心柱。

7.加入500 μL抑制物去除液Buffer IR，12,000 rpm离心30秒，弃废液。

8.加入600 μL漂洗液Buffer WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm离心30秒，弃掉废液。

9.加入600 μL漂洗液Buffer WB，12,000 rpm离心30秒，弃掉废液。

10.将吸附柱Spin AC放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

11.取出吸附柱Spin AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100 μL洗脱缓冲液Buffer TE（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好），室温放置3-5分钟，12,000 rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000 rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

12.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。