磁珠法细菌DNA提取试剂盒
MagBeads gDNA Extraction Kit for Bacteria
包装规格：
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MA1612-50
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磁珠法全血DNA提取试剂盒
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50T
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600元
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MA1612-100
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磁珠法全血DNA提取试剂盒
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100T
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960元
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MA1612-200
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磁珠法全血DNA提取试剂盒
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200T
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1730元
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MA1612-32
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磁珠法全血DNA提取试剂盒(预封装)
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32T
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600元
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MA1612-96
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磁珠法全血DNA提取试剂盒(预封装)
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96T
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1440元
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备注：新货号MA1612，旧货号MD2512。
【重要声明】本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读本说明书，并严格按照操作步骤进行实验。
一.试剂盒组成、储存、稳定性：
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Contents
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Storage
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MA1612‑50
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MA1612‑100
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50T
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100T
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Buffer RB
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RT
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30 mL
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60 mL
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Buffer TL
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RT
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21 mL
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42 mL
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Buffer CB
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RT
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25 mL
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50 mL
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Buffer DW1
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RT
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31 mL
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62 mL
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Buffer DW2
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RT
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15 mL
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30 mL
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45 mL
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90 mL
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Buffer IR
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RT
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3.1 mL
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6.2 mL
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Buffer EB
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RT
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6 mL
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12 mL
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Proteinase K(20mg/mL)
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-20℃
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1 mL
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2 x 1 mL
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MagBeads
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4℃
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1 mL
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2 x 1 mL
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备注：
1. Buffer DW2第一次使用前按说明加指定量乙醇；
2. MagBeads 保存温度4‑8℃冷藏，避免冷冻，实验开始前将MagBeads静置到室温，使用前需充分振荡至分散均匀。
二.保存条件：
本试剂盒在室温(15°C‑25°C)干燥条件下可保存12个月，Proteinase K (20mg/mL)需单独‑20℃低温保存。
三.自备试剂与设备：
无水乙醇，超纯水；
漩涡振荡器、恒温水浴锅(或金属浴)、磁力架、离心机、组织匀浆器或组织研磨仪，吸头、移液器、离心管等；
四.产品简介：
本试剂盒基于功能性生物磁珠的特异性吸附原理，通过优化的缓冲液系统，实现从各类细菌中快速分离纯化高质量基因组DNA。磁珠在高盐条件下选择性结合核酸，低盐条件下释放核酸，整个过程无需酚、氯仿等有毒有机试剂，操作安全便捷。提取的基因组DNA片段完整、纯度高，可直接用于PCR、荧光定量PCR、基因测序、酶切、Southern杂交等下游分子生物学实验。
五.产品特点：
1.高效快速：整个实验流程1小时内完成，无需长时间离心或沉淀；
2.安全无毒：替代传统酚/氯仿抽提，操作过程安全，对环境友好；
3.纯度优异：提取的DNA A260/A280比值1.7‑1.9，无蛋白、RNA污染，可直接用于高通量测序等高端实验；
4.灵活便捷：支持手工操作，也可适配自动化核酸提取仪，满足不同实验规模需求。
六.适用范围：
适用于快速提取各种细菌基因组DNA。
七.注意事项：
1.样本处理需在超净台或生物安全柜中进行，穿戴防护衣物、手套和口罩，避免样本交叉污染；
2.使用前检查试剂状态：Buffer TL若有沉淀，可置于37℃水浴溶解后混匀；磁珠悬液使用前需充分振荡10‑15秒，确保磁珠均匀分散；
3.吸取磁珠时避免枪头触碰管壁，防止磁珠吸附残留；每次振荡后需瞬时离心(3000rpm，5秒)，将管壁和管盖的液体收集至管底；
4.洗涤步骤中，去除上清时枪头需贴近液面但避免接触磁珠，防止磁珠流失；洗涤后需确保乙醇完全挥发(观察磁珠表面无反光或裂隙)，但避免磁珠过度干燥(易导致DNA洗脱不完全)；
5.样本应避免反复冻融，否则会导致DNA片段断裂和提取量下降；洗脱液建议65℃预热，可提高DNA回收率；
6.所有耗材（离心管、枪头）需无菌无核酸酶，实验台面和移液器定期消毒。
八.操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
1.取0.5‑2 mL培养菌液（最多不超过2×10
9个细胞），10,000 rpm，离心30秒，尽可能的吸弃上清，收集菌体。
起始处理量可以根据细菌密度、细胞种类、预期产量进行调整，但是磁珠最大吸附能力有上限，如果菌体过量超过最大吸附能力，反而会严重降低产量。
2.加入200 μL缓冲液Buffer RB重悬，10,000 rpm离心30秒，弃上清。将细胞振荡或者吹打充分重悬于180 μL缓冲液Buffer RB中。
注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶进行破壁处理，具体方法为：加入180 μL缓冲液(20 mM Tris, pH 8.0；2 mM Na
2‑EDTA；1.2% Triton X‑100；临用前加入终浓度为20 mg/mL的溶菌酶(溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制，否则会导致溶菌酶无活性))，37 ℃处理30 min以上。
3.加入20 μL蛋白酶K (20mg/mL)溶液，充分混匀，再加入400 µL Buffer TL，立刻涡旋振荡，充分混匀。在65℃放置20‑30 min。溶液应变清亮（但颜色偏黑色）。
可选步骤：如果RNA残留较多，需要去除RNA，可以在加入400 µL Buffer TL前加4 μL RNase A(100mg/mL)溶液，振荡混匀，室温放置5‑10 min。
4.加入60 μL Buffer IR，立刻颠倒混匀15秒，在冰上静置3分钟，13,000 rpm 4℃离心5 min，吸取上清液500 μL到新的1.5 mL离心管中。
5.实验开始前将磁珠静置平衡到室温，MagBeads使用前需充分振荡至分散均匀，向含上清液离心管中加入20 μL MagBeads，再加入500 μL Buffer CB，数次颠倒混匀，或者使用移液器吹打至磁珠分散均匀，室温静置10分钟，期间每隔 2 分钟混匀一次，保持磁珠处于悬浮状态。
6.将离心管移至磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附后，吸弃上清。
7.加入600 μL DW1，移开磁力架，数次颠倒混匀，或者使用移液器吹打至磁珠分散均匀，再将离心管移至磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附后，小心吸弃全部上清。
8.加入600 μL DW2，移开磁力架，数次颠倒混匀，将离心管置于磁力架上，反复颠倒磁力架，静置磁力架磁吸2 min，待磁珠完全吸附后，小心吸弃全部上清。该洗涤操作重复1次。
9.打开离心管盖，将离心管置于磁力架上，室温开盖干燥 5 ~10 min 至无乙醇残留（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）。
10.移去磁力架，向1.5 mL离心管中加入50‑100 μL洗脱液Buffer EB，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，56℃水浴5‑10 min。
11.将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取含DNA上清液至新的Nuclease‑free 1.5 mL离心管中，即得到高纯度的基因组DNA。
12.DNA可以存放在2‑8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。
九.FAQ问题与解决方法：
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问题
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评论与建议
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DNA产量低
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1.样本量不足或样本质量差，使用新鲜收集的细菌样本。
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2.磁珠未充分混匀，使用前充分涡旋磁珠悬浮液，确保磁珠均匀分散。
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3.结合时间不足，延长结合时间至15 分钟。
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4.洗脱不充分，增加洗脱液体积；延长56℃孵育时间至15分钟。
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5.磁珠过度干燥，缩短干燥时间至5 分钟。
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DNA纯度低
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1.蛋白质残留，增加裂解时间10‑30 分钟；确保洗涤步骤充分。
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2.盐离子残留，增加洗涤液 DW2 的洗涤次数。
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3.乙醇残留，延长干燥时间至10 分钟。
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DNA降解
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1.样本采集后保存不当，样本采集后尽快提取，或‑20℃冻存。
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2.操作过于剧烈，避免过度涡旋，轻柔操作。
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磁珠团聚
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1.磁珠保存不当，2‑8℃保存，使用前充分涡旋混匀。
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2.缓冲液温度过低，所有缓冲液使用前室温平衡。
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下游PCR反应失败
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1.DNA 中存在抑制剂，增加洗涤次数；用洗脱液稀释DNA 后使用。
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2.乙醇残留，确保干燥步骤充分。
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3.DNA 浓度过低，减少洗脱体积，浓缩DNA。
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