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一次性核酸检测试纸条(三重)
核酸胶体金试纸条(三重)/横向流动试纸条LFD(三重)
LFD3 Nucleic acid Strips(Testing 3)

一.工作原理
本产品采用层析式双抗体夹心法快速检测核酸扩增产物。利用两种针对同一目标分子不同位点的特异性抗体，分别作为捕获抗体(固定于检测线)和标记抗体(结合于胶体金等标记物上)，通过 “三明治” 结构特异性识别目标分子。
免疫层析技术平台‑试纸条结构包括：样品垫、结合垫(含标记抗体)、检测线(T 线，固定捕获抗体)、质控线(C线，固定二抗)、吸水垫，通过毛细管作用驱动样品流动。
待测样品先通过试剂盒提取DNA或RNA，DNA直接扩增，RNA需经逆转录成cDNA，经过PCR，RPA，RAA，LAMP扩增生成带标记的核酸产物。
结合垫预包被胶体金标记的抗体，该抗体能特异性识别目标分子上的标记物(生物素抗体)。当样品加入试纸条后，样品垫中的液体溶解结合垫的标记抗体，携带目标分子(生物素标记的核酸产物)向检测线移动。
检测线固定另一特异性抗体(捕获抗体)，针对目标分子的另一位点(如核酸上的另一个标记物(FITC/Digoxin/TAMRA)。当标记抗体‑目标分子复合物移动至检测线时，被捕获抗体识别并结合，形成“捕获抗体‑目标分子‑标记抗体” 三明治结构，富集的标记物(胶体金)显现出肉眼可见的条带。
质控线固定抗标记抗体的二抗，用于捕获未结合目标分子的多余标记抗体。无论样品中是否存在目标核酸，C线必须显色，以证明试纸条的层析系统正常工作。
与传统的琼脂糖凝胶电泳检测相比，核酸检测试纸条操作简单，判读迅速，不含有毒物质，无需任何仪器设备。

二.靶基因探针设计
第一个靶基因(T1)上游引物(或下游引物)的5’端标记为6‑羧基四甲基罗丹明(TAMRA)，下游引物(或上游引物)5’端标记为生物素(Biotin)，确保两种标记物可以同时整合到双链的扩增产物上。
第一个靶基因(T2)上游引物(或下游引物)的5’端标记为异硫氰酸荧光素(FITC)或6‑羧基荧光素(6‑FAM)，下游引物(或上游引物)5’端标记为生物素(Biotin)，确保两种标记物可以同时整合到双链的扩增产物上。
第一个靶基因(T3)上游引物(或下游引物)的5’端标记为地高辛(Digoxin)，下游引物(或上游引物)5’端标记为生物素(Biotin)，确保两种标记物可以同时整合到双链的扩增产物上。

三.预期用途
本产品适用于PCR扩增，RPA，RAA，LAMP等温扩增核酸扩增产物，野外现场，快速试纸条检测。

四.包装规格/货号
货号：A4623‑50
包装规格：1条/包×48，铝箔袋防潮包装。

五.储存条件及有效期
储存条件：存放于避光干燥处，储存温度20~30℃。有效期：12个月。

六.操作步骤
1.根据检测样品数量取出相应数量的胶体金检测卡，并在胶体金检测卡(图1)上做好标记。每根胶体金检测卡只能用于单次、单个样品的检测。
2.PCR或RPA扩增后，用带滤芯的吸头取适量扩增产物到新的PCR管中，用稀释液液(Tris‑HCL 0.05M，pH8.0)或者无菌ddH2O稀释10‑80倍，根据实际情况选择合适缓冲液，摸索最佳稀释倍数，吹打混匀后进行检测。 
3.吸取80‑100uL稀释的扩增产物滴加在胶体金检测卡点样孔中。
4.根据试纸条显色情况直接读取检测结果，质控线(C线)显色后3‑10min内观察结果。
5.记录检测结果，将试纸条密封丢弃在安全处。

七.结果判读
1.阳性(+)：
1.1靶标1阳性：检测卡出现质控线(C)出现蓝色条带，检测线T1(TAMRA)出现红色条带，则靶标1为阳性；
1.2靶标2阳性：检测卡出现质控线(C)出现蓝色条带，检测线T2(FITC/FAM)出现红色条带，则靶标2为阳性；
1.3靶标3阳性：检测卡出现质控线(C)出现蓝色条带，检测线T3(Digoxin)出现红色条带，则靶标3为阳性；
1.4双重阳性：检测卡出现质控线(C)出现蓝色条带，检测线T区出现两条红色条带，分别位于T1、T2、T3中的两处，则对应两个靶标均为阳性；
1.5三重阳性：检测卡出现质控线(C)出现蓝色条带，检测线T区出现三条红色条带，则对应三个靶标均为阳性；
阳性结果表明样本中含有待检测的核酸片段，且其数量≥检测卡的最低检出量。当目的核酸产物浓度较低时，试纸条C线显色呈蓝色，T线呈淡红色，甚至浅粉色条带，该结果也应判定为阳性。当目的核酸产物浓度较高时，试纸条C线显色呈蓝色，T线呈红色，该结果也应判定为阳性。

2.阴性(-)：
检测卡出现蓝色条带质控线(C)，检测线(T1，T2和T3)没有红色条带；
阴性结果表明样本中不含目的核酸片段，或其数量低于试纸条的最低检出量。
3.无效：
检测卡出现蓝色条带质控线(C)未出现条带，无论T1、T2或T3是否出现条带，均表示结果无效，提示所用的试纸条或扩增试剂可能已经损坏、失效或操作有误。
此时，应仔细阅读说明书，重新扩增和检测。如果问题仍然存在，应立即停止使用同一批号的产品，并与厂家联系。

一次性核酸检测试纸条(三重)结果判读示意图

八.注意事项及安全提示
1.本产品仅供科研使用。使用前请仔细阅读说明书，严格按照说明书操作。违反或者未按说明书进行操作可能导致错误结果。
2.产品应依照说明书要求，储存于合适的环境和温度下，并在有效期内使用。储存不当或产品过期可能导致错误结果。打开包装后请尽快使用试纸条，以免因试纸条受潮影响试验结果。检测环境光线不足，操作者色弱等因素均可能能导致错误结果。
使用完毕后，应尽快将纸条装进密封袋，妥善处理。本产品为一次性使用产品，请勿重复使用。